本作主人公“杀手先生”（樱井孝宏 配音）是一名职业杀手，只要接到委托就什么都杀，甚至是自己的父母或者是小学生的暑假作业。他有个弟子，是父母双亡的小学生，因为崇拜杀手先生而拜其为师。登场人物还有要向杀手先生报杀父之仇的17岁巨乳美少女、与杀手先生有多次近距离接触的警长、一条名为“五郎”的警犬。本动画每集篇幅为3分钟，充满了大量令人捧腹的冷笑话，可以说是以杀手先生为中心的冷笑话集锦。杀手先生虽然长相帅气，为人冷酷，实际上是个冷面笑匠，与美少女、警长等角色的接触中，产生各种超乎意料的搞笑桥段。 本动画改编自TAMACHIKU创作的四格漫画。
其原有沙 宫野真守 驹田航 滨田龙臣 石丸博也 石黑英雄 宇治清高 根岸拓哉 高桥健介 日野聪 森次晃嗣 真夏龙 叶山翔太 寺岛拓笃 畠中祐 小川辉晃 小野友树 内田雄马 刘明月 闫夜桥 赵震 齐斯伽 杉浦太阳 李兰陵 皇贞季 潘惠美 宝木中阳 诹访部顺一 郭盛 小池亮介 平田雄也 福山润 户松遥 藤新 叶知秋 图特哈蒙 七濑彩夏 安元洋贵 常蓉珊 高峰圭二 关智一 长谷川初范 薛城 李轻扬 曹云图 郝祥海 叮当 难波圭一 王晨光 林帽帽 佟心竹 乔菲菲 刘琮 金光宣明 三森铃子 张震 武内骏辅 樱井孝宏
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