故事发生在日本的元志元年，江湖险恶，人心动荡。为了复仇，个头矮小父母双亡的少年铁之助（小林由美子 配音）以成为“鬼”为目标，要求加入当时十分有威望的武士组织新撰组。在新撰组里，铁之助认识了外表温柔剑术高超的一番组组长冲田总司（斋贺弥月 配音），以及外表鬼畜却心思细密的新撰组副长土方岁三（中田让治 配音）。组中各类有趣的人等让铁之助的生后变得多姿多彩，而柔弱的少女沙夜（高桥美佳子 配音）更是撩动了少年稚嫩的心弦。在新撰组内，严明的纪律必不可少，有时甚至严苛到了违背人性的地步。目睹着和激进攘夷派做着不懈斗争的组员，看着他们为了维护自己的尊严宁可丢失性命，铁之助在心里暗下决心，要让这武士道精神流传下去。
其原有沙 宫野真守 驹田航 滨田龙臣 石丸博也 石黑英雄 宇治清高 根岸拓哉 高桥健介 日野聪 森次晃嗣 真夏龙 叶山翔太 寺岛拓笃 畠中祐 小川辉晃 小野友树 内田雄马 刘明月 闫夜桥 赵震 齐斯伽 杉浦太阳 李兰陵 皇贞季 潘惠美 宝木中阳 诹访部顺一 郭盛 小池亮介 平田雄也 福山润 户松遥 藤新 叶知秋 图特哈蒙 七濑彩夏 安元洋贵 常蓉珊 高峰圭二 关智一 长谷川初范 薛城 李轻扬 曹云图 郝祥海 叮当 难波圭一 王晨光 林帽帽 佟心竹 乔菲菲 刘琮 金光宣明 三森铃子 张震 武内骏辅 樱井孝宏
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